摘要:【背景】大肠杆菌由于生长性能优良、遗传背景清晰，常被用作苏氨酸生产菌。【目的】敲除大肠杆菌Escherichia coli THR苏氨酸合成途径的非必需基因，并异源表达苏氨酸合成必需的关键酶，构建一株苏氨酸高产菌株。【方法】利用FLP/FRT重组酶系统，敲除E. coli THR中lysC、pfkB和sstT，同时进行谷氨酸棒杆菌中lysCfbr、thrE和丙酮丁醇梭菌中gapC的重组质粒构建并转化到宿主菌中。【结果】以E. coli THR为出发菌株，敲除其苏氨酸合成途径中表达天冬氨酸激酶III (AKIII)的基因lysC、磷酸果糖激酶II基因pfkB及苏氨酸吸收蛋白表达基因sstT，使菌株积累苏氨酸的产量达到75.64±0.35 g/L，比出发菌株增加9.9%。随后异源表达谷氨酸棒杆菌中解除了反馈抑制的天冬氨酸激酶(lysCfbr)、苏氨酸分泌转运蛋白(thrE)及丙酮丁醇梭菌中由gapC编码的NADP+依赖型甘油醛-3-磷酸脱氢酶，获得重组菌株E. coli THR6菌株。该菌株积累苏氨酸的产量提高到105.3±0.5 g/L，糖酸转化率提高了43.20%，单位产酸能力提高到5.76 g/g DCW，最大生物量为18.26 g DCW/L。【结论】单独敲除某个基因或改造某个途径不能使苏氨酸大量合成和积累，对多个代谢途径共同改造是构建苏氨酸工程菌的最有效方法。