摘要:【背景】猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)引起的母猪流产或死胎、仔猪呼吸道症状并伴随死亡率升高的一种传染性疾病。【目的】建立一种特异性强、灵敏度高、操作简捷、检测时间短的PRRSV抗体化学发光检测方法，用于检测PRRSV抗体水平。【方法】以羧基磁珠作为固相载体偶联PRRSV重组N蛋白，用适量的牛血清白蛋白(bovine serum albumin, BSA)进行封闭，加入检测样品进行反应，以兔抗猪IgG-AP抗体作为酶标二抗，加入相应底物进行显色，优化各项反应条件，建立PRRSV抗体化学发光检测方法，并对该方法的特异性、灵敏度、重复性和符合率进行验证。【结果】建立的PRRSV抗体化学发光检测方法的血清样品稀释倍数为1:30，蛋白与羧基磁珠偶联pH值为8.0，蛋白偶联量为20 μg/mL，使用20 μL 10% BSA溶液封闭最佳，磁珠稀释液用量为1 mL，酶标二抗稀释度为1:20 000，一步反应时间为20 min，二步反应时间为10 min，底物反应时间为3 min。根据背景清晰的PRRSV临床血清样本制标准曲线，通过绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic, ROC)曲线确定阴阳临界点为32.56 U，当临床PRRSV抗体阳性样品稀释到4倍时，ELISA和化学发光检测方法均鉴定为阴性，说明该化学发光检测方法具有良好的灵敏度。与非洲猪瘟病毒、经典猪瘟病毒、猪乙脑病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型、猪流行性腹泻病毒抗体阳性血清均无交叉反应。重复性试验中，批内变异系数为2.79%-5.32%，批间变异系数为1.05%-11.31%，均<15%，与商品化猪繁殖与呼吸综合征抗体检测试剂盒阳性符合率93.8%，阴性符合率96.3%，总符合率96.1%。【结论】本研究建立的PRRSV抗体化学发光检测方法可用于PRRSV疫苗接种后或感染痊愈后抗体水平检测，为后续试剂盒的开发提供参考。

摘要:【背景】非洲猪瘟(African swine fever, ASF)作为高致病性传染病，给我国生猪养殖业造成了严重的经济损失，因此建立快捷、灵敏的诊断方法至关重要。【目的】建立一种管式非洲猪瘟病毒pp62蛋白化学发光抗体检测方法。【方法】以重组pp62蛋白作为包被抗原，羧基磁珠(carboxylic magnetic beads)作为固相载体，碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, AP)标记的兔抗猪IgG作为酶标二抗，通过对反应条件进行优化，采用非洲猪瘟国家参考品作为溯源血清绘制出标准曲线，建立基于ASFV pp62蛋白的化学发光抗体检测方法。【结果】用建立的化学发光方法检测277份临床样品血清，通过受试者工作特征(receiver operating characteristic, ROC)曲线分析确定阴性、阳性临界值，并确定判定标准：浓度值>140.02 U时为抗体阳性，浓度值<140.02 U时为抗体阴性。此方法对6种不同的病原血清抗体进行检测均无交叉反应，且批内和批间变异系数均在10%以内，与商品化非洲猪瘟抗体检测试剂盒的符合率达96.7%。【结论】本研究建立的管式非洲猪瘟病毒化学发光抗体检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性，可为非洲猪瘟早期监测及试剂盒研发提供参考。