2010, 37(2):0174-0178.
摘要:表面展示酶作为全细胞催化剂具备诸如能提高酶的稳定性、省去纯化过程、节约成本等优点。脂肪酶是应用最为广泛的工业酶之一。本研究利用酿酒酵母细胞壁蛋白Cwp2作为锚定蛋白, 将解脂耶氏酵母脂肪酶Lip2展示在酿酒酵母细胞表面, 以制备脂肪酶全细胞催化剂。Lip2被融合到Cwp2的N端, Cwp2通过其C端的GPI锚定信号共价结合到细胞壁上。表面展示的Lip2可以水解三丁酸甘油酯及对硝基苯酚辛酸酯(pNPC), 其pNPC水解酶活达到4.6 U/g干细胞。作为全细胞催化剂, 表面展示的Lip2具备良好的催化特征, 其最适温度为40°C, 最适pH为8.0, 同时还具备良好的有机溶剂稳定性。
2024, 51(6):1854-1872.DOI: 10.13344/j.microbiol.china.231091CSTR: 32113.14.j.MC.231091
摘要:细菌细胞表面展示是一项重要的生物工程技术,其将外源靶标蛋白、多肽或其他生物大分子表达于细菌表面,以更好地实现其功能。该技术在生物催化、生物修复、生物传感器和疫苗设计等多个领域得到广泛应用。本文首先对革兰氏阴性细菌和革兰氏阳性细菌的表面展示系统进行介绍,概括了目前已知的主要宿主菌和锚定蛋白种类;然后重点阐述了细菌表面展示技术在生物修复领域的最新应用研究进展;最后总结了细菌表面展示技术在应用中存在的局限性,并展望了未来可能的发展方向,以期深入扩大和拓展该技术在生物修复实践中的具体应用。
2010, 37(7):0992-0998.
摘要:分别将乳酸乳球菌(Lactococcus lactis) N-乙酰葡糖胺糖苷酶基因(acmA)的信号肽序列(ss)、C-末端结构域(cA)及全长基因, 与来自大肠杆菌(Escherichia coli)的超氧化物歧化酶(SOD)基因sod构建成融合基因ss-cA-sod和acmA-sod, 并连接于表达载体pMG36K, 然后导入乳酸乳球菌ATCC11454菌株, 获得了能在细胞表面展示SOD的重组工程菌MB193和MB194。经SDS-PAGE验证, 重组菌MB193和MB194可分别表达产生分子量约为46和64 kD的融合酶蛋白cA-SOD和AcmA-SOD。通过黄嘌呤氧化酶法测定MB193和MB194菌株的全细胞Mn-SOD酶活力分别为(2.63 ± 0.51) U/mL和(3.51 ± 0.64) U/mL, 明显高于仅在细胞内表达产生SOD的对照重组菌MB192的酶活性(1.53 ± 0.38) U/mL, 且表达融合酶AcmA-SOD的重组菌MB194具有最大的表面展示效率(56.4%)。