摘要:【背景】羟基萘还原酶(hydroxynaphthalene reductase，HNR)是1,8-间苯二酚(1,8-dihydroxynaphthalene，DHN)黑色素合成途径中起关键作用的酶，研究表明HNR不仅参与真菌黑色素合成，而且对其生长发育及致病性也具有一定的调控作用，但HNR对真菌病原物侵染结构分化的调控研究鲜见报道。【目的】在对梨果黑斑病菌互隔交链孢(Alternaria alternata) HNR的基因进行克隆与生物信息学分析的基础上，通过药理学方法初步探讨HNR对A.alternata生长及侵染结构分化的调控作用，为进一步揭示HNR在A.alternata侵染结构分化形成过程中的分子机制提供理论依据。【方法】对梨果黑斑病菌A.alternata的2个hnr基因进行了克隆；通过gene structure display server、open reading frame (ORF) Finder及conserved domain search等数据库及相关软件，对hnr基因及蛋白进行生物信息学分析，并利用HNR特异性抑制剂三环唑处理分析其对A.alternata生长发育、黑色素合成和侵染结构形成的影响，同时采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)技术分析了hnr基因在A.alternata不同侵染结构分化时期的表达特性。【结果】从梨果黑斑病菌A.alternata克隆得到2个羟基萘还原酶基因hnr的编码区全长，分别命名为Aa4hnr和Aa3hnr，其中Aa4hnr基因全长为1 266 bp，编码了268个氨基酸，无内含子，有9个ORF；Aa3hnr基因全长为1 356 bp，编码了267个氨基酸，含有2个大小分别为51 bp和49 bp的内含子，有17个ORF；进化分析表明，Aa4hnr和Aa3hnr与Ophiobolus disseminans和Alternaria arborescens分别具有较高的一致性，同时Aa4hnr和Aa3hnr编码的蛋白均含有NAD (P)结合域，属于短链脱氢酶/还原酶(short-chain dehydrogenase/reductase，SDR)家族。药理学结果表明，三环唑处理显著降低了A.alternata DHN黑色素的生物合成，抑制了疏水性诱导的A.alternata侵染结构的形成；进一步分析Aa4hnr和Aa3hnr在疏水表面诱导的A.alternata孢子萌发阶段(2 h)、附着胞形成阶段(6 h)、侵染菌丝形成阶段(8 h)的基因表达量，Aa4hnr的基因表达量在A.alternata侵染结构分化的各个时期均发生下调，Aa3hnr在附着胞形成阶段(6 h)表达量下调，然而在侵染菌丝形成阶段(8 h)显著上调表达。【结论】Aa4hnr和Aa3hnr对梨果黑斑病菌侵染具有一定的调控作用。

摘要:【背景】几丁质是真菌细胞壁的重要成分，由几丁质合成酶（chitin synthase，CS）催化合成。几丁质合成酶编码基因在大型食用真菌金针菇中的数量及表达规律尚不明确。【目的】探究几丁质合成酶基因在金针菇中存在的数量及其在子实体不同发育时期的表达规律，为其在大型真菌子实体生长发育过程中的功能研究提供基础。【方法】基于已有的金针菇菌株L11基因组数据，结合NCBI其他真菌CS序列鉴定金针菇中几丁质合成酶编码基因的数量，并对其进行生物信息学分析。进一步根据金针菇F19转录组数据以及实时荧光定量PCR （RT-qPCR）技术分析金针菇CS基因家族的表达规律。【结果】在金针菇单核体菌株L11的基因组中鉴定到9个几丁质合成酶基因，系统发育分析表明它们在子实体发育过程中的表达模式可分为4类（皮尔森相关系数=0.85）。【结论】金针菇CS基因家族表达模式在金针菇不同生长发育时期均存在差异，可能参与了子实体发育不同时期和组织的形态建成。