摘要:【背景】鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer，RA)可感染雏鸭、鹅、火鸡等多种禽类，引起急性或慢性传染病。RA血清型众多，且各血清型之间缺乏有效的交叉保护。细菌脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)位于革兰氏阴性菌细胞壁的外侧，其组成和结构变化决定了细菌表面抗原决定簇的多样性。【目的】制备血清2型鸭疫里默氏杆菌LPS单克隆抗体并对其特性进行研究。【方法】以血清2型RA NJ3株免疫BALB/c小鼠，细胞融合后以RA NJ3株LPS作为包被抗原，筛选出能够稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株，通过体内诱生腹水法制备抗体，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测单克隆抗体效价，玻片凝集试验和Western blot检测单抗特异性。【结果】获得两株能稳定分泌抗血清2型鸭疫里默氏杆菌LPS单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为8G5和8G10；两株单抗的亚型均为IgM/κ链。ELISA结果表明，8G5和8G10腹水效价分别为1:32 000和1:16 000。Western blot结果显示，两株单抗仅与血清2型RA菌株发生特异性反应，而与其他血清型RA菌株和禽源致病菌无反应性。【结论】研究获得的单克隆抗体具有良好的反应性和血清型特异性，可用于RA致病机制的基础研究和进一步建立RA血清型快速检测方法。

摘要:【背景】许多研究表明，支原体的NADH氧化酶(NADH oxidase，NOX)不仅在胞浆中发挥生物酶学功能，也存在于细胞膜上发挥黏附宿主细胞功能。【目的】对滑液支原体(Mycoplasma synoviae，MS)的NOX进行酶学活性及亚细胞定位研究，分析其在MS致病过程中的潜在作用。【方法】对MS的NOX蛋白进行原核表达、纯化，然后对重组MSNOX (rMSNOX)的酶学活性及影响酶活的条件进行研究，测定其酶比活力、米氏常数及最大反应速率，接着用MS阳性血清及制备的rMSNOX兔多克隆抗体，分别与rMSNOX蛋白及MS全菌、膜蛋白和胞浆蛋白进行Western blotting反应，鉴定rMSNOX的免疫原性及其在MS中的分布情况。【结果】在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达rMSNOX蛋白，相对分子质量约为53 kD，并获得纯化的rMSNOX蛋白；酶活测定显示rMSNOX蛋白的酶比活力为14.17 IU/mg，最适酶促温度为37 °C，最适pH为7.5，双倒数法求得rMSNOX的最大反应速率Vmax为21.8 μmol/(L·min)，米氏常数Km(NADH)为244.0 μmol/L；rMSNOX蛋白与MS阳性血清特异性结合，证明具有良好的免疫原性；亚细胞定位研究表明NOX蛋白主要存在于MS的胞浆中，细胞膜上有少量的分布。【结论】首次证实MS的NOX不仅具有NADH氧化酶活性，也是MS具有免疫原性的膜蛋白，为进一步探索NOX在MS致病过程中的作用提供了分子基础。