抗甲肝病毒基因工程单抗分离纯化与鉴定

摘要:

为克服血源免疫球蛋白制品的不足，开发了抗甲肝病毒基因工程单克隆抗体anti-HAV IgG。用无血清培养基培养rCHO工程细胞株，上清液经过rProtein A SFF亲和层析→脱盐→离子交换层析→超滤换液纯化后，所得anti-HAV IgG纯度达99%以上，比活性约100IU/mg，anti-HAV IgG活性回收率40%。所纯化的anti-HAV IgG分子量150kD，等电点8.4～9.3。免疫印迹实验证实anti-HAV IgG为人源全抗体分子。亲和层析介质rProtein A SFF确实存在亲和配基脱落问题，但通过后续纯化步骤可有效除去。在亲和层析过程中加入高盐清洗步骤，可有效降低宿主DNA残留量水平。对样品中自由巯基含量进行了测定，认为非还原电泳图谱中低分子量条带是由于抗体分子内存在自由巯基引起。用该工艺制备的anti-HAV IgG各项纯度检测指标均达到我国对基因工程产品的质量要求。

关键词:重组人抗甲肝病毒单抗， 蛋白纯化， 亲和层析， rProtein A残留量

Abstract:

Key words:重组人抗甲肝病毒单抗， 蛋白纯化， 亲和层析， rProtein A残留量