摘要:

摘要:碱性螺旋-环-螺旋 (Basic helix-loop-helix, bHLH) 转录因子在生命活动过程中发挥着重要的调控作用。Bmsage是家蚕丝腺中高量表达的一类bHLH转录因子，不仅参与了丝腺细胞在胚胎期的发育调控，而且对蚕丝蛋白的合成也有至关重要的调控作用，然而当前对其性质和结构了解不多。为研究其性质、结构和生物学功能，构建了NusA、MBP、SUMO、Trx和His融合标签的Bmsage重组原核表达载体，通过改变诱导温度和IPTG浓度，确定了Bmsage在大肠杆菌中可溶性表达的最佳载体和表达条件，进而通过镍柱亲和层析纯化获得了Bmsage，利用圆二色光谱研究了其二级结构。结果表明，NusA与MBP标签可显著增强Bmsage在大肠杆菌中的可溶性表达，但难以与Bmsage分离。SUMO标签有一定的助溶效果，并且能够与Bmsage有效分离。其他标签对Bmsage可溶性表达的效果不明显。圆二色光谱分析表明Bmsage含有α-helix结构，推测SUMO标签可能促进了Bmsage折叠形成类天然的结构。这些工作为深入研究Bmsage的性质、结构与功能建立了基础，同时也为其他类似蛋白的表达纯化提供了参考。

摘要:通过外源转录调控因子的诱导，使成体细胞重编程为胚胎干细胞 (ES细胞) 样的多能细胞，这种细胞称为诱导多能干细胞 (iPS细胞)，这一方法被称为iPS技术。目前，iPS技术已先后在小鼠、人、猕猴、大鼠和猪中成功应用，建立了相应的iPS细胞系，并获得了iPS细胞嵌合小鼠和四倍体克隆小鼠。尽管iPS与ES细胞在形态和生长特性上有许多相同之处，但iPS细胞的建立需要较独特的诱导培养体系和鉴定方法。以下结合近年来iPS技术的发展和本实验室的相关研究，对iPS细胞的建立和培养体系的优化进行了深入探讨。

摘要:鲎C因子是鲎血细胞中一种对内毒素具有高亲和力的丝氨酸蛋白酶，被内毒素激活后可水解人工合成的三肽底物，因而能替代传统的鲎试剂用于内毒素检测。通过RT-PCR从东方鲎血细胞中扩增出鲎C因子基因 (factor C) 序列，利用Bac-to-Bac/BmNPV杆状病毒表达系统在家蚕幼虫中表达该蛋白，并对其进行活性测定。结果显示：被感染的家蚕血清稀释后能检测到Factor C活性，稀释500倍的血清可以用于内毒素检测，且其灵敏度能达到0.2 EU/mL，有望开发新型的、低成本的内毒素检测试剂。