摘要:硝酸转运蛋白(nitrate transporter,NRT)与铵转运蛋白(ammonium transporter,AMT)是小麦无机氮素吸收、转运、分配的一类重要跨膜蛋白，获得NRT/AMT蛋白并制备其抗体有助于了解其组织定位特点，理解小麦的氮素利用过程。本研究从前期鉴定到的405个TaNRT/TaNPF基因和23个TaAMT基因中，筛选并克隆到了4个表达量较高的基因：TaNPF4.5、TaNPF8.3、TaNRT3.1、TaAMT1.2。利用HMMER软件对4个转运蛋白进行跨膜结构域预测，确定拟表达区段，并进行原核表达和纯化。在37℃、1 mmol/L IPTG诱导条件下，非跨膜区段TaNPF4.5、TaNPF8.3、TaNRT3.1诱导4 h后表达量最大且为包涵体形式，TaAMT1.2诱导3 h后表达量最大，主要是可溶性表达。非跨膜区段TaNPF4.5、TaNPF8.3、TaNRT3.1采用pH梯度分离纯化，TaNPF4.5在pH 2.0时蛋白纯度约为87%，TaNPF8.3在pH 3.0时纯化蛋白纯度约为85%，均可用于抗体制备，TaNRT3.1的蛋白纯度未达到85%；TaAMT1.2采用咪唑梯度分离纯化，在咪唑浓度为20 mmol/L时纯度约95%，并成功制备了抗体。TaAMT1.2的表达纯化与抗体制备，为TaNPF4.5、TaNPF8.3等膜蛋白表达纯化及抗体制备提供了思路，为研究小麦膜蛋白表达与定位特点奠定了基础。