摘要:为了从酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae中克隆出乙醇脱氢酶2 (Alcohol dehydrogenase 2，ADH2) 基因并使之在大肠杆菌中高效表达。以酿酒酵母细胞中提取的总RNA为模板，通过反转录获得酿酒酵母乙醇脱氢酶2基因，连接到表达载体pTAT上，得到重组表达质粒pTAT-ADH2，将此重组质粒转化到大肠杆菌BL21中，重组工程菌株经IPTG诱导表达得到ADH2蛋白。将该蛋白纯化后，在体外进行活性检测和小鼠体内进行毒理试验，检测ADH2的酶活性。测序结果表明克隆的基因与GenBank中所报道的adh2基因序列有90％的同源性，经SDS-PAGE电泳分析，目的蛋白得到了有效表达，蛋白条带扫描分析表明，表达量占总蛋白的50％左右，纯化得到的蛋白在小鼠体内进行毒理试验，显示出一定的活性。酿酒酵母adh2基因的克隆正确，不仅在大肠杆菌中进行了高效表达而且表现出了较好的酶活性。

摘要:为探讨表达猪流行性腹泻病毒(PEDV) 核蛋白(N)基因的重组干酪乳杆菌口服免疫小鼠后诱导特异性免疫应答，本研究制备表达流行性腹泻病毒核蛋白的重组干酪乳杆菌, 应用Western blotting、间接免疫荧光和全细胞ELISA鉴定目的蛋白的表达。然后用该重组干酪乳杆菌口服免疫BALB/c小鼠, 分别测定了免疫后不同时间血清中特异性IgG、粪便中特异性的sIgA水平以及血清的中和活性; 并测定免疫小鼠脾淋巴细胞增殖情况和细胞因子水平。结果显示, 目的蛋白表达在细胞表面, 可被阳性血清所识别。免疫小鼠后, 可分别在血清中和粪便中检测到较高水平特异性IgG、sIgA(P<0.01), 但血清并没有中和活性; 淋巴细胞增殖试验和细胞因子测定结果显示, 免疫组可产生明显的细胞免疫应答。结果表明, 该重组干酪乳杆菌表达系统可诱导小鼠产生黏膜免疫应答和系统免疫应答, 具有作为口服疫苗潜在的应用价值。

摘要:为研究本实验室制备的一株抗蓝舌病病毒8型 (BTV-8) VP2蛋白的单克隆抗体 (MAb) 3G11识别的B细胞抗原表位，利用噬菌体肽库展示技术对3G11识别的抗原表位进行筛选并鉴定。经过4轮淘选后挑取蓝斑测序，测序结果经分析后获得KLLAT序列，与BTV-8 VP2蛋白氨基酸序列比对后获得共同的短肽序列为283LL284；合成4种短肽序列：KLLAA、KALAT、KLAAT和KLLAT，与3G11细胞上清和腹水分别进行间接ELISA鉴定，结果表明，短肽KLLAA和KLLAT与3G11细胞上清及腹水具有较强的结合能力；与24种BTV标准阳性血清反应结果表明，这两种短肽都可与BTV-8阳性血清发生特异性反应；序列分析结果可见，该表位的氨基酸序列283LL284在不同来源的BTV-8毒株间保守，确定283LL284为MAb3G11识别抗原表位的关键氨基酸。本研究为建立8型BTV特异性的免疫学检测方法和相关病毒蛋白的功能研究奠定了基础。

摘要:旨在建立蓝舌病病毒4型 (BTV-4) 特异性抗体ELISA检测方法，为蓝舌病的免疫学诊断提供新的技术。利用制备的两株抗4型BTV VP2蛋白的单克隆抗体4A-1G7和4B-1B6，建立BTV-4特异性竞争ELISA抗体检测方法。利用该方法同时对50份羊和牛BTV阴性血清进行检测，分别确定两种方法阻断率临界值为49%和40%。利用标准阳性血清检测的试验结果表明，该方法的敏感性、特异性和重复性符合OIE通用标准。同时，4A-1G7和4B-1B6两种竞争ELISA方法联合作用，可以检测感染4、18和20型BTV的血清。研究结果为建立以上各型BTV的检测方法提供了基础。