摘要:海洋微生物溶菌酶发酵上清液经超滤、CM-SepharoseFF阳离子交换层析和SephadexG-10 0凝胶过滤层析纯化得到电泳纯的溶菌酶,纯化倍数为34.7,活力回收为24.1%。对纯化溶菌酶性质研究表明,该酶分子量约为39kD ,对溶壁微球菌的最适作用温度为35℃,最适作用pH为8 0 ,在5 0℃以下和pH 5 0～10 0之间都有较好的稳定性,与常见金属离子和化学试剂有良好的配伍性,广谱杀菌,对多种致病菌也有较强的溶菌作用。

摘要:通过功能筛选方法, 从中国南海海洋表层海水微生物元基因组文库筛选得到了6个β-葡萄糖苷酶阳性克隆。对其中的一个阳性克隆pSB47B2进一步亚克隆和序列分析, 获得一新型β-葡萄糖苷酶基因(命名为bgl1B)开放阅读框。以pET22b(+)为载体、Escherichia coli BL21(DE3)为宿主菌, bgl1B被高效活性重组表达。通过Ni-NTA亲和层析柱纯化了重组Bgl1B (rBgl1B)。纯化的rBgl1B催化pNPG水解反应的最适pH为6.5, 最适温度为40oC。在最适反应条件下, rBgl1B水解pNPG的活性达到39.7 U/mg, Km和Vmax 分别为0.288 mmol/L、36.9 μmol/min。纤维二糖是rBgl1B的有效作用底物, 其Km和Vmax 分别为0.173 mmol/L、35 μmol/min。但rBgl1B不能催化转化蔗糖、乳糖、麦芽糖以及CMC。rBgl1B催化pNPG的水解反应对高浓度的Na+有较好的耐受性, 而低浓度的Ca2+、Mn2+对该酶活有一定促进作用。不同于许多来源于真菌的酸性β-葡萄糖苷酶, rBgl1B在pH 7.0到9.0范围内具有比较高的酶活力并具有较好的稳定性。