摘要:Myostatin (MSTN，肌肉生长抑制素) 基因属于TGF-β超家族，对骨骼肌的生长发育具有负调控作用。该基因的功能缺失，能够引起肉用动物的“双肌”表型，从而提高产肉率。基因打靶技术是制作转基因动物的常用方法。构建了两个置换型打靶载体pA2T-Mstn4.0和pA2T-Mstn3.2，通过同源重组将G938A突变点引入秦川牛MSTN基因第三外显子。电穿孔方法转染秦川牛胎儿成纤维细胞，经过600 μg/mL G418和50 nmol/L GCV的药物正负筛选，共得到170个药物抗性细胞克隆。对细胞克隆进行PCR、测序及Southern blotting 鉴定，结果显示，第58号细胞克隆为发生了正确同源重组的中靶细胞。牛胎儿成纤维细胞中的MSTN基因的一条等位基因被成功改造。