摘要:以RT-PCR方法，从经丝裂原诱导的猪外周血淋巴细胞总RNA中扩增出编码猪IFNγ的基因。经测序证实后插入载体pJLA503，并实现在大肠杆菌中的高表达。表达产物以包涵体形式存在，经7mol/L盐酸胍变性及精氨酸存在的情况下复性。再经DEAE-Sepharose离子交换柱、Sephdex-200凝胶过滤柱分离获得电泳单一纯猪IFN-γ蛋白，细胞病变抑制实验检测纯化产物有干扰素活性。

摘要:将人Leptin表达质粒pBV220-OB转化E.coliJM109，经热诱导获得了目的蛋白的表达。经SDS-PAGE鉴定分析，表达产物以包涵体形式存在，目的蛋白表达量占菌体总蛋白的40%以上。通过包涵体分离，Sephacryl S200HR凝胶和DEAE52离子交换层析及Hypersil C18柱反相色谱纯化，获得纯度在95%以上，内毒素含量小于10EU/mg的高纯度的重组人Leptin。Western-blot鉴定表明，纯化表达产物能和抗Leptin抗体特异性结合；蛋白质N端15个氨基酸序列分析结果和预期的序列一致。纯化产物经复性处理，其分子中Cys96和Cys146形成二硫键。体内活性检测显示，纯化和复性的rh-Leptin明显抑制BALB/c小鼠的进食和体重增长，提示其具有明显的生物学活性。

摘要:轮状病毒是世界范围内引起婴幼儿病毒性腹泻的主要病原体。VP7是轮状病毒的主要外壳蛋白和中和抗原，是发展基因工程疫苗的首选。把包含全部3个主要抗原性区域的轮状病毒SA11 VP7基因片段以谷胱甘肽S转移酶融合蛋白的形式在大肠杆菌中进行表达，表达产物占菌体总蛋白的30%左右。经一步Glutathione Sepharose4B亲和纯化，重组蛋白纯度超过90%。Western blot实验表明，重组蛋白可被抗SA11的多抗特异地识别。动物实验表明，重组抗原可在小鼠和家兔体内诱导VP7特异的抗体和一定水平的SA11中和抗体。

摘要:利用启动子探针型载体pSUPV8直接在大肠杆菌(Escherichia coli)中分离黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)基因启动子片段，获得6个潮霉素抗性(Hyg-r)重组子。对重组子CH2、CH6进行序列分析，结果发现它们都存在真核生物基因启动子的保守序列；用原生质体转化法将其转化黄孢原毛平革菌，仅pCH6获得了潮霉素抗性转化子；PCR和斑点杂交分析表明，pCH6已成功导入黄孢原毛平革菌，并启动潮霉素抗性基因的表达。

摘要:从霍乱疫苗菌中抽提基因组DNA，用PCR的方法扩增zot基因。序列分析表明，zot基因编码399个氨基酸，其中4个氨基酸与文献报道有差异。将zot基因插入含T7启动子的质粒pET28(a+)构建表达质粒pET-ZOT，转化大肠杆菌BL21(DE3)筛选表达菌株BLZOT。表达菌株经1mmol/L IPTG诱导表达3～5h后，表达大量ZOT蛋白，并形成包涵体。经SDS-PAGE分析重组ZOT蛋白分子量约为47kD，凝胶自动扫描分析表明，重组ZOT约占菌体可溶性蛋白量的15%以上。本工作为进一步研究蛋白多肽类药物的口服奠定了良好的基础。

摘要:

摘要:将重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子/白细胞介素3(GM-CSF/IL-3)融合蛋白表达菌BL21(DE3)(pFu)作为研究对象，对于以乳糖作为诱导剂时重组目的产物的诱导表达规律进行了深入的研究。分析比较了不同培养基中，不同生长阶段进行诱导对于产物表达的影响。对诱导所需的乳糖浓度、诱导持续时间长短等因素亦进行了研究。实验结果表明，在对诱导条件进行优化控制的前提下，利用乳糖作为诱导剂可以达到与IPTG类似的诱导效果。随后的研究中，将乳糖作为诱导剂应用于高密度发酵过程。这些研究结果为乳糖作为诱导剂最终应用于重组基因工程药物的工业化生产提供了有益的参考和借鉴。

摘要:利用带有氯霉素乙酰转移酶报道基因的检测载体，从痘苗病毒基因组DNA中筛选到一个增强子样片段VV16。序列分析表明，该片段长112bp，是痘苗病毒DNA依赖性RNA聚合酶、polyA聚合酶亚单位和DNA聚合酶基因RPO30的一部分，含有4个AT丰富区。采用带有β-半乳糖苷酶报道基因的载体检测发现，该片段正向可以增强报道基因表达9.0倍，反向可以增强报道基因表达4.1倍。RNA Dot blotting实验证实，它对基因的增强活性表现在转录水平上。DNA删切实验证实，5′端10bp及3′端12bp对其活性有重要调节作用，而该片段nt76～82的序列对增强子的活性至关重要。

摘要:确定了工程菌MM2中霍乱毒素B亚单位(CTB)在含乳酸培养基中的高表达方案。采用两阶段控制培养温度(30℃→37℃)可提高CTB产量4倍,提高后期pH值(72→84)可提高CTB比表达水平214倍,中间补加乙酸钠可提高CTB产量65%。在5L发酵罐培养菌密度OD600达30,CTB产量达1867mg/L,产物在培养液中以多聚体形式存在,具有抗原性。

摘要:通过PCR扩增和酶切分别得到抗结肠癌相关抗原抗体的重链可变区序列、轻链可变区序列及连接肽序列，将它们构建成为VHlinkerVL形式的单链抗体基因片段，并在大肠杆菌中进行了表达。SDS-PAGE分析结果表明，以pComb3为载体，在大肠肝菌JM83中，scFv未获得有效表达，而以pET22b(+)为载体的scFv在大肠杆菌BL21(DE3)中，30℃诱导培养获得了高效表达，表达水平占全菌蛋白的35.5%。